eCF506（又称NXP900，CAS号1914078-41-3）是一种基于吡唑并嘧啶骨架的高选择性SRC家族激酶抑制剂，对SRC的IC??低于0.5 nM，对ABL的选择性差异超过950倍[1]。与传统SRC/ABL双靶点抑制剂不同，eCF506采用独特的构象选择性抑制机制——将SRC锁定在其天然无活性的"闭合"构象，同时阻断激酶催化活性和支架蛋白复合物形成功能[2]。该化合物具有口服生物利用度，目前已以NXP900代号进入临床I期试验，用于晚期实体瘤的治疗评估[5]。

产品核心信息

eCF506的核心技术参数如下：

eCF506在DMSO中具有较好的溶解度，但水溶性极低，体内给药时可采用CMC-Na混悬液或
5%DMSO/40%PEG300/5%Tween80/50%ddH?O的配方体系。瀚香生物建议科研人员使用新开封的DMSO配制储备液，避免吸湿影响溶解度。

作用机制与核心优势

独特的构象选择性抑制机制

SRC是一种非受体酪氨酸激酶，在细胞中以"闭合"（无活性）和"开放"（活性）两种构象动态存在。当SRC处于开放构象时，其SH2和SH3结构域释放，可与其他蛋白（如FAK，局灶黏附激酶）形成复合物，驱动下游信号传导[2]。

现有临床SRC抑制剂（如达沙替尼、博舒替尼、沙卡替尼）均属于I型抑制剂，它们将SRC锁定在活性开放构象。这带来一个矛盾：虽然催化活性被阻断了，但SRC的SH2/SH3结构域暴露在外，反而促进了SRC与FAK等信号伙伴的组装。实验数据显示，达沙替尼处理后SRC-FAK复合物水平增加了3倍[2]。

eCF506采用了截然不同的策略——它属于I.5型抑制剂，将SRC锁定在天然失活闭合构象。在这个状态下，SH2和SH3结构域与激酶结构域相互作用形成紧密结构，物理上阻断了与大分子蛋白的接触。共结晶结构（PDB: 7NG7）显示，eCF506结合后SRC的C-螺旋外移，K298-E313盐桥（活性激酶的标志）未形成，与天然自抑制状态的SRC高度一致[2]。

流体力学半径测定进一步验证了这一机制：达沙替尼使SRC结构"打开"，而eCF506维持SRC在更紧凑的构象，类似未结合配体的SRC。热位移实验也显示两者对SRC表观熔解温度产生相反方向的影响[2]。

双功能阻断：催化+支架

因为闭合构象的SRC无法暴露SH2/SH3结构域，eCF506在抑制激酶催化活性的同时，也阻断了SRC的支架蛋白功能。共免疫沉淀实验证实，eCF506处理后FAK与SRC的复合物水平降低50% ，而达沙替尼则使该复合物增加3倍。博舒替尼和沙卡替尼同样促进SRC-FAK结合[2]。

这种双功能阻断带来了FAK-Y397磷酸化的差异调控：达沙替尼浓度依赖性地增加FAK-Y397磷酸化，而eCF506则降低该位点磷酸化。在SYF细胞（缺乏SRC、YES、FYN的小鼠胚胎成纤维细胞）中，两种抑制剂均不影响FAK-Y397磷酸化，排除了直接抑制FAK的可能性[2]。

激酶组范围的高选择性

在340种野生型蛋白激酶的酶抑制筛选中（1 μM浓度），eCF506仅使25种激酶活性降至50%以下，其中SRC是抑制程度较高的靶点（残余活性0.1%）。9个命中靶点属于SRC家族。相比之下，达沙替尼在半数浓度下命中51种激酶，博舒替尼命中85种激酶[2]。

eCF506对SRC家族关键成员的抑制活性：

SRC与ABL之间超过950倍的活性差异是eCF506区别于现有临床抑制剂的核心优势。达沙替尼和博舒替尼均同时强效抑制ABL（残余活性分别为2.8%和1.8%），而eCF506处理后ABL仍有56%活性[2]。这种选择性差异可能解释了eCF506更好的安全性表现。

与临床SRC抑制剂的对比

研究历程

eCF506的研发始于爱丁堡大学Asier Unciti-Broceta团队与Valeri Brunton、Neil Carragher等合作者的共同努力。2016年，Fraser等人在《Journal of Medicinal Chemistry》上报道了通过快速发现和构效关系研究，从吡唑并[3,4-d]嘧啶骨架出发，获得了一系列高效抑制乳腺癌细胞生长且对ABL具有优异选择性的SRC激酶抑制剂[1]。eCF506即为该系列中活性较优的化合物（文中编号11a）。

2021年，Temps等人在《Cancer Research》上系统阐明了eCF506的构象选择性抑制机制，通过共结晶结构、生物物理表征和细胞实验，证明锁定SRC闭合构象可同时抑制催化和支架功能，并在同基因小鼠模型中显示出优于达沙替尼的抗肿瘤效果和耐受性[2]。

随后，eCF506以NXP900的代号授权给Nuvectis Pharma公司进行临床开发。2023年，Dash等人在食管鳞癌模型中验证了NXP900的临床前疗效，发现其可强效抑制YAP1核定位并诱导肿瘤消退[3]。2024年AACR年会上公布的数据显示，NXP900在ALK和EGFR抑制剂耐药的非小细胞肺癌细胞系中也表现出强效增殖抑制[4]。2025年4月，Falchook等人在AACR年会上报告了NXP900的首个人体I期临床试验结果：在26例晚期实体瘤患者中，20-200 mg/天的剂量范围内表现出可接受的安全性和剂量比例的药代动力学特征[5]。

制备方法与路线

eCF506的合成以吡唑并[3,4-d]嘧啶为核心骨架，主要合成路线如下[1]：

第一步：吡唑并嘧啶环的构建。 以5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈为起始原料，与甲酰胺在微波辐射下180°C反应2小时，环化生成1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，收率93%。

第二步：碘化反应。 将上述产物悬浮于DMF中，加入N-碘代丁二酰亚胺（1.2当量），微波180°C反应40分钟，得到3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，收率73%。

第三步：N-烷基化。 在DMF中以NaH为碱，将碘化产物与溴代乙醛二乙缩醛反应，微波150°C反应40分钟，在N1位引入含氧保护基的乙基侧链，收率64%。

第四步：Suzuki偶联。 将N-烷基化中间体与硼酸酯在钯催化下进行Suzuki交叉偶联，引入芳基取代基。

第五步：侧链置换与脱保护。 最终通过侧链胺置换反应引入4-(二甲基氨基)哌啶基团，并完成Boc保护基和甲氧基的安装，得到目标化合物eCF506。

整个合成路线的关键在于吡唑并嘧啶骨架的构建和C-3位芳基的Suzuki偶联引入，这为后续的构效关系优化提供了灵活的化学空间。

行业前景与应用用途

SRC家族激酶与肿瘤

SRC是首个被发现的致癌基因产物，SRC家族激酶（包括SRC、YES、FYN、LCK、LYN、HCK、BLK等9个成员）在细胞黏附、侵袭、增殖、存活和血管生成中发挥关键作用。在正常细胞中，SFK主要处于失活状态；而在肿瘤组织中，SFK被高度激活[5]。

SFK的异常激活与多种肿瘤密切相关，包括乳腺癌、结直肠癌、肺癌、前列腺癌等。尤其在三阴性乳腺癌和雌激素受体阳性乳腺癌中，SRC的驱动作用更为显著。临床数据显示，eCF506对三阴性和ER+乳腺癌细胞系的GI??值低至0.015-0.22 μM[2]。

克服耐药的潜力

近年来，SFK激活被发现在多种靶向药物的获得性耐药中扮演重要角色。在EGFR突变非小细胞肺癌中，SFK/FAK信号通路的代偿性激活削弱了奥希替尼的疗效；在ALK阳性肺癌中，alectinib耐药同样伴随SRC/FAK和YAP1通路的激活[4]。

NXP900在临床前研究中展现出逆转耐药的潜力：与奥希替尼联用时，PC9-OR1耐药细胞系的GI??从1,508 nM降至121 nM；与alectinib联用时，NCI-H2228-ALR1耐药细胞系的增殖抑制也得到恢复[4]。这为eCF506在联合治疗中的应用提供了理论基础。

临床研究进展

NXP900-101研究（NCT05873686）是一项首个人体I期剂量递增和扩展临床试验，纳入26例晚期实体瘤患者。中位年龄61岁，65%为男性，既往抗肿瘤治疗中位线数为5线。剂量范围20-200 mg/天口服给药[5]。

安全性方面，常见治疗期不良事件多为1-2级，包括乏力（42%）、腹泻（35%）、恶心（31%）和呼吸困难（23%）。药代动力学分析显示，200 mg单次口服给药后中位达峰时间约3小时，末端半衰期约12小时，多次给药后出现中度蓄积。药效学分析证实，NXP900在临床相关剂量下可有效抑制外周血单核细胞中SRC的磷酸化[5]。

上下游与靶点总体情况

SRC信号通路上下游

SRC处于多条信号通路的交汇节点：

• 上游激活因子：整合素、生长因子受体（EGFR、PDGFR、VEGFR）、G蛋白偶联受体等，均可通过不同机制激活SRC。

• 下游底物：FAK、p130CAS、paxillin、p190RhoGAP、Shc、Stat3等。其中FAK是SRC较关键的相互作用伙伴，SRC通过磷酸化FAK的Y576/577、Y861、Y925等位点，调控细胞黏附和迁移。

• 支架功能：SRC作为支架蛋白，通过SH2/SH3结构域介导蛋白-蛋白相互作用，组装信号复合物。eCF506的独特之处正在于同时阻断SRC的催化和支架功能。

SRC抑制剂研发格局

目前已获批或进入临床的SRC抑制剂多为多靶点药物，如达沙替尼（SRC/ABL双抑制，已获批CML）、博舒替尼（SRC/ABL双抑制）、沙卡替尼（SRC/ABL）等。这些药物因同时抑制ABL而具有血液学毒性，且因激酶谱广泛导致脱靶效应。

eCF506（NXP900） 作为目前公开报道中少有的SRC选择性构象抑制剂，通过锁定闭合构象实现双功能阻断，在安全性上展现出差异化优势：在同基因小鼠模型中，eCF506治疗组未观察到达沙替尼常见的心脏毒性，脾脏和心脏重量指标均优于达沙替尼组[2]。在非癌性乳腺上皮细胞MCF10A中，eCF506的EC??超过10 μM，而达沙替尼在低微摩尔浓度即可降低50%以上的细胞活力[2]。

常见问题FAQ

Q：eCF506与达沙替尼的核心区别是什么？

eCF506将SRC锁定在天然失活闭合构象（I.5型抑制），同时阻断催化和支架功能；达沙替尼将SRC锁定在活性开放构象（I型抑制），仅阻断催化活性，反而促进SRC与FAK等信号伙伴的组装。此外，eCF506对ABL的选择性差异超过950倍，远低于达沙替尼的ABL抑制活性。

Q：eCF506是否已进入临床？

是的，eCF506以NXP900为代号，由Nuvectis Pharma推进临床开发。I期临床试验（NCT05873686）已在晚期实体瘤患者中完成剂量递增阶段，20-200 mg/天剂量下显示出可接受的安全性和生物活性[5]。

Q：eCF506的口服生物利用度如何？

eCF506的口服生物利用度为25.3%，属于中等水平[1]。在I期临床试验中，200 mg单次给药后半衰期约12小时，支持每日一次或两次口服给药方案[5]。

Q：eCF506在哪些肿瘤类型中表现出活性？

临床前研究显示，eCF506在三阴性乳腺癌、ER+乳腺癌、食管鳞癌、结直肠癌等模型中均有活性。在ALK或EGFR抑制剂耐药的非小细胞肺癌中，NXP900联合用药也显示出逆转耐药的潜力[2][4]。瀚香生物提醒，以上均为临床前数据，临床疗效尚需进一步验证。

Q：eCF506的溶解性如何？实验中有何建议？

eCF506在DMSO中溶解度较好（62.5-100 mg/mL），在水中几乎不溶。建议使用新开封的无水DMSO配制储备液，避免吸湿影响溶解度。储备液可在-80°C分装保存，避免反复冻融。

参考文献

[1] Fraser C, Dawson JC, Dowling R, et al. Rapid Discovery and Structure-Activity Relationships of Pyrazolopyrimidines That Potently Suppress Breast Cancer Cell Growth via SRC Kinase Inhibition with Exceptional Selectivity over ABL Kinase. J Med Chem. 2016;59(10):4697-4710.

[2] Temps C, et al. A Conformation Selective Mode of Inhibiting SRC Improves Drug Efficacy and Tolerability. Cancer Res. 2021;81(21):5438-5453.

[3] Dash S, et al. Preclinical efficacy of NXP900, a YES1/SRC kinase inhibitor in esophageal squamous cancer models. J Clin Invest. 2023;133(7):e162324.

[4] Carragher NO, et al. NXP900, a novel YES1/SRC Kinase Inhibitor in Phase 1, Demonstrates Potent Inhibition of Proliferation in Cell Lines Resistant to ALK and EGFR Inhibitors. AACR Annual Meeting 2024, Abstract 35119.

[5] Falchook G, Rodon Ahnert J, Kummar S, et al. First in human phase 1 trial of the SRC family kinase inhibitor NXP900 in patients with advanced solid tumors. Cancer Res. 2025;85(8_Supplement_2):CT153.

风险提示与实验注意

● 药理风险：eCF506为SRC家族激酶选择性抑制剂，对ABL等非靶激酶仍有一定抑制活性（IC??=479 nM），实验设计中需关注脱靶效应。

● 实验风险：eCF506水溶性极低，体内实验需注意制剂配方的选择和稳定性。口服生物利用度约25%，给药方案需根据PK数据合理设计。

● 实验注意事项：DMSO储备液建议分装保存于-80°C，避免反复冻融。细胞实验中DMSO终浓度建议不超过0.1%。eCF506对不同乳腺癌亚型的敏感性差异较大，HER2+细胞株可能不敏感，需根据研究目的选择合适细胞系。

本文内容基于公开发表的科学研究数据，由瀚香生物收集整理，仅供科研人员参考与学术交流，不可用于个人用途。